对于放大倍数、NA值大小一致,WD的长短有无什么特别的地方?
咨询一下,使用在倒置显微镜上的物镜,若两个放大倍数一样,NA值一致,WD有长短之分,请问WD的区别有无什么关系,是长WD的好还是短WD的好?为什么呢?
1、 物镜有两个核心参数,数值孔径和工作距离,两者成反比关系,NA越大则WD越小,NA越小WD越大,所以正置显微镜配置的物镜NA都很大,但WD很小,主要是正置显微镜看切片,所以要求物镜分辨率很大.
但倒置显微镜主要用来观察活细胞或进行微操,所以对物镜要求很大的WD,所以倒置显微镜的物镜一般都选配长工作距离的物镜.
其实有时候,倒置显微镜也可以加正置显微镜的高NA的物镜,例如激光共聚焦一般都配高NA的APO物镜,也有用户在倒置显微镜上配一两个高NA的物镜,因为有些用户也用倒置显微镜看切片,由于经费有限,在倒置显微镜上同时进行活细胞和切片观察.
但如果把长WD的物镜要是加在正置显微镜时,就一定要小心两者的视场数有所不同了.
倒置显微镜上的物镜,若两个放大倍数一样,NA值一致,WD有长短之分,根据用户要求了,因为倒置显微镜一般看的是物镜的WD,所以有些用户要求WD越大越好了.当然有些用户想比较折中的话,就WD小些,则NA就大些了,灵活应用吧
2、NA值和孔径角基本上是同一种意义,而WD跟孔径角没有必然的关联
所谓的WD越短,孔径角越大,是有前提的,透镜直径一致的前提。如果没有这个前提,则不存在NA/孔径角和WD的直接相互关联
以现在的技术来讲,NA值极大,则必然对WD有所影响,但是NA值/孔径角值和WD没有一个**的换算公式,也就是没有很**的关系,所以同样的NA值也存在不同的WD
另外,回过头来说,为什么要讲究WD呢?10倍下10mm和13mm的差别在哪里呢?100倍下0.1和0.12的差别又在哪里?要据我理解的话,越长的WD光损失还越大,引入杂光的概率还越高。
所谓长工作距离,只是为了满足观察培养皿/培养瓶类标本而衍生出来的概念和技术,只要能透过培养皿/瓶,这就是长工作距离的本质。WD谁比谁长多少有多重要呢?
据我所知,目前除了电生理技术以外,在物镜和标本之间需要大量操作空间的实验并不多,而这样的操作均有其特殊的镜头来满足这种需要。
一种应用就有一种讲究,鄙人认为理想的全能的状态是不存在,很多事物本身的存在就是一种矛盾。一昧追求高NA或WD意义何在,NA已经由介质和开口角决定了它的极限;而WD,相信我给一个NA很高的天文望远镜给各位老师去看细胞的话,相信老师都会宁愿选择WD普通的显微镜物镜。
科研可以钻牛角尖,而实际应用又是另一回事了。